一、 菌種
(一)、細菌:大腸桿菌(Escherichia coli)、枯草桿菌(Bacillus subtilis) 和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus);
(二)、真菌:啤酒酵母(Saccgaromyces cerevisiae)、米曲霉(Aspergillus oryzae)3402、黑曲霉(Aspergillus niger)、葉點霉(Phyllosticta maydis )和刺盤孢霉(Colletotrichum musae)
二、 培養(yǎng)基
(一) 細菌培養(yǎng)液:LB
液體:胰蛋白胨10.0g 酵母提取物5.0g NaCl 10.0g10mol/LNaOH 100μL 蒸餾水定溶至1.0L pH 7.0~7.4 如要配置固體LB培養(yǎng)基,加15.0g瓊脂糖/L
(二)、真菌培養(yǎng)液:馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA) 馬鈴薯(去皮切塊) 200.0g 葡萄糖 20.0g 瓊脂 18.0g, 蒸餾水 1000mL pH 自然
三、 器材
培養(yǎng)皿(90mm)、濾紙、三角耙、接種環(huán)、試管
四、 實驗步驟
(一)、抑菌圈的測定(濾紙片法)
1、菌種接種 將保存菌種反復轉(zhuǎn)種2次,使菌種新鮮,細菌置30℃,恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1d,霉菌置27℃,恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d,備抗菌實驗用
2、菌懸液制備 在超凈臺里將轉(zhuǎn)接后生長良好的菌種試管斜面注入適量無菌水(約5mL),接種環(huán)輕刮菌落,搖晃,置旋渦混合器混勻。
3、倒平板 在超凈臺里將培養(yǎng)基倒入平板,每板約15mL左右,水平放置,凝固后倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中,2d后觀察是否有菌落生長,若沒有則可供下一步實驗使用,否則需重新倒平板。
4、涂布在超凈臺里用槍取0.1ml菌懸液注入平板,放置5min左右后用三角耙涂布均勻,每種菌設置兩個重復平板。
5、貼片在超凈臺里將平板平均分為6個區(qū),對角設置平行組,同時用無菌水做對照組,硫酸鏈霉素(10U)作陽性對照。每兩張濾紙片(直徑1.1cm或0.6cm)為一貼,用鑷子夾著濾紙片在樣品中輕輕蘸一下后,取出貼在平板的位置,輕摁一下使濾紙片牢固,置(正放)4℃冰箱中放24h。
6、培養(yǎng)24h后放入(倒置)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細菌30℃,霉菌27℃。細菌培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果,霉菌72h后觀察結(jié)果。
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